一、服務簡介

      RT -PCR即逆轉錄-聚合酶反應。原理是：提取組織或細胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo（dT）或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板進行PCR擴增，而獲得目的基因或檢測基因表達。RT-PCR使RNA檢測的靈敏性提高了幾個數量級，使一些極為微量RNA樣品分析成為可能。該技術主要用于：分析基因的轉錄產物、獲取目的基因、合成cDNA探針、構建RNA高效轉錄系統。

      逆轉錄-聚合酶鏈反應 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取組織或細胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo（dT）或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板進行PCR擴增，而獲得目的基因或檢測基因表達。

二、技術流程

1、設計并合成Realtime PCR引物。 

2、引物溶解后使用Promega的TaqDNA聚合酶進行含SG（SYBR?； Green）的PCR反應的優化。 

3、客戶樣品RNA抽提 。實驗對象為組織樣品，取適量（50-100mg）新鮮組織樣品或正確保存的組織樣品加1ml的RNA抽提試劑Trizol（Invitrogen），勻漿后抽提RNA。 實驗對象為細胞樣品，每份樣品取1×106～1×107細胞，PBS清洗細胞，去PBS加1mlRNA抽提試劑Trizol（Invitrogen），裂解后抽提RNA 。

4、RNA質量檢測  

a、紫外吸收測定法測定RNA在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，以計算其濃度并評估RNA純度 。b、使用ambion公司的甲醛電泳試劑進行變性瓊脂糖凝膠電泳，檢測RNA純度及完整性。 

5.、使用逆轉錄酶（Promega）進行反應，將樣品RNA逆轉錄為cDNA。 

6、制備標準曲線樣品： 進行相對定量，需要先將樣品的目的基因以及管家基因進行PCR擴增，其產物進行梯度稀釋用于做標準曲線。 

7、標準曲線樣品和待測樣品分別加入到含SG的RealTime PCR反應液中，進行 RealTime PCR擴增和檢測。 8、檢測結果進行標準曲線分析：以對待測樣品的目的基因進行定量。相對定量實驗需要進一步用樣品的目的基因測得值除以管家基因測得值以校正誤差，所得結果代表某樣品的目的基因相對含量。 

9、提供實驗報告：包括詳細的實驗方法及實時熒光定量PCR實驗結果的相關圖表 

三、服務說明

1、請您提供新鮮的且盡量多的材料，或直接提供純化好的總RNA或DNA（大于5ug/樣本）。如是如織：100－200mg

2、請通過EMAIL提供已知的全長基因序列。Email:huameixinan@163.com

3、請提供詳細背景資料：DNA/RNA來源，豐度。

四、成果展示

五、詢價及訂購

感謝您選擇我公司的RT-PCR檢測服務。如有相關問題請聯系我們的工作人員。